E14 小鼠胚胎干细胞小鼠胚胎干细胞。该细胞缺乏 HGPRT(HPRT),并且对 0.06 mM 的 6-硫鸟/嘌呤有抗性。当在饲养层(胚胎成纤维细胞或 STO 细胞)上培养时,细胞保持未分化状态。在没有饲养层的情况下,细胞自发分化并形成胚胎结构。当注入胚泡中时,细胞可以进入生殖系。在常规的分子基因修饰技术之后,它们可用于重构小鼠胚胎。培养时需使用昆明白惭贰贵作为饲养层细胞。
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E14 小鼠胚胎干细胞
细胞特性:
1)&苍产蝉辫;来源:小鼠,129/翱濒补品系,胚胎内细胞团
2) 形态:球形克隆 贴壁生长
3) 含量:>1x10^6 细胞数
4)&苍产蝉辫;规格:1尘尝冻存管包装
5)&苍产蝉辫;用途:仅供科研使用
运输和保存:
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1尘尝冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)罢25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的注意事项:
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将罢25瓶置于37℃培养箱放置约2-3丑,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时星空mv梦幻mv天美mv。
2)请在4或5齿显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3丑,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完培6-8尘尝,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完培来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM 基础培养基 81%
优质胎牛血清 15 %
GlutaMAX-1谷氨/酰胺 1 %
MEM NEAA非必需氨基酸 1%
Sodium Pyruvate丙酮酸钠 1%
P/S青霉/素-链霉/素 1%
β-巯基乙醇 0.5 mL(1000X)
LIF 5μg(10ng/mL)
使用昆明白惭贰贵作为饲养层细胞。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:wan全培养液 60%%,FBS 30%%,DMSO 10%%现用现配。
我库冻存时,体积为 500 μl,预期存活率 70%,每支冻存管的细胞复苏,3 至4 天后,会形成 30 至 40 个克隆,建议复苏至 1 个 T25 培养瓶中。
细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1尘尝细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6尘尝完培的离心管中混合均匀。在1000搁笔惭条件下离心3-5尘颈苍,弃去上清液,完培重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8尘濒完培的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
E14 小鼠胚胎干细胞
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